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灵芝的化学成分
信息来源：岭南中药网收集 发布时间：2015/2/15（1）化学成分分析
据现代研究表明：灵芝子实体含有灵芝多糖、灵芝酸、腺苷、麦角甾醇、甘露醇、牛磺酸、内酯、灵芝碱、生物碱；灵芝孢子中有孢醚等成分。另外，灵芝中含有多种矿物质，特别是有机锗的含量比其他生物都高。下面是广州中医药大学灵芝GAP基地产品
1）不同赤芝菌株中多糖含量比较测定
采用蒽酮一硫酸显色法，以活性炭吸附除去色素，用85%乙醇去除低聚糖，基本排除干扰因素，使灵芝多糖含量测定准确（见表29-5）。
表29-5不同赤芝菌株中多糖含量（ω）比较、（n=3）（%）
菌株
ω(x±s)
kRSD
日本菌株A
0.5066±0.0153
3.02
日本菌株B
0.4553±0.0049
1.08
日本菌株C
0.582±0.0195
3.34
日本菌株7号
0.6438±0.0076
1.18
野生菌种D
0.4507±0.0154
3.41
野生菌种E
0.4296±0.0190
4.42
从表29-5实验结果表明：以日本菌株7号进行段木培养的灵芝质量较好。
2）不同产地赤芝挥发性成分含量比较测定（见表29-6）
表29-6不同产地赤芝挥发性成分含量测定（%）
编号
化合物名称
广州
浙江
揭阳
1
辛醛
0.30
2
己酸
2.61
1.76
3
α-辛稀醛（E）
0.10
4
庚酸
0.17
5
壬醛
0.64
0.51
6
辛酸
0.56
0.53
7
癸醛
0.12
0.10
8
2-癸烯醛（E）
0.29
0.23
9
壬酸
0.85
0.38
0.43
10
2-十一烯酮
0.08
11
2-十一烯醛
0.20
12
癸酸
0.10
13
8-羟基辛酸
0.28
0.47
14
2，6-二叔基对甲酚
0.14
15
十二碳酸
0.43
0.36
0.31
16
反异榄香素
0.32
17
柏木烯醇
0.38
0.13
18
壬二酸
1.62
19
2-3-藁本内脂
0.13
20
十四碳酸
2.62
2.62
2.85
21
十五碳酸
10.07
5.66
10.65
22
十五碳酯乙酯
0.11
23
9-十六碳烯酸
3.28
5.28
1.93
24
十六碳酸
49.70
32.30
48.01
25
十六酸乙酯
0.27
26
十七碳酸
0.25
27
十八碳烯酸
13.86
28
9，12-十八碳二烯酯（Z，Z）
26.88
29
9-十八碳烯酸
19.63
17.04
30
十八碳酸
0.32
0.45
从表29-6看出：不同产地的赤芝，不仅化合物含量有差异，甚至化合物种类也不同。
3）不同产地赤芝中灵芝酸V含量比较测定（见表29-7）
表29-7不同产地赤芝中灵芝酸B含量测定
产地
灵芝酸B（mg/g）
RSD（%）
广州
0.53
1.32
龙门
0.26
0.85
阳山
0.21
2.10
广州清平药材市场
0.44
2.20
河南商品
0.19
1.25
浙江商品
0.41
1.81
安徽商品
未检出
不同居群的灵芝中灵芝酸B含量差别较大，有的产区的商品甚至不含灵芝酸B。这可能与产区选择的菌株以及栽培技术等因素有关。
4）不同产地赤芝中总氮量比较测定（见表29-8）
表29-8不同产地赤芝中总氮量测定产地
产地
平均值±s
CV（%）
广州I
2.01±0.041
2.02
广州II
2.52±0.053
2.11
龙门
2.15±0.055
2.56
始兴
1.91±0.029
4.95
揭阳
1.54±0.044
2.83
日本
1.59±0.035
2.24
对照药材
1.90±0.048
2.54
从表29-8看出：广州、龙门、始兴产的赤芝，总氮量髙于对照药材。
5）不同产地赤芝人体必需氨基酸含量测定结果，见表29-9
表29-9，不同产地红椎段木赤芝氨基酸含量测定
氨基酸名称
揭阳红椎
龙门红椎
对照品
苏氨酸
0.45570
0.5150
0.3646
缬氨酸
0.6006
0.6496
0.4128
甲硫氨酸
0.0789
0.0860
0.0619
异亮氨酸
0.4487
0.4976
0.4587
亮氨酸
0.6743
0.7287
0.5242
苯丙氨酸
0.4495
0.4839
0.3074
赖氨酸
0.4156
0.4234
0.2326
必需氨基酸总量
3.1233
3.3842
2.3622
从表29-9显示：龙门红椎段木灵芝氨基酸含量大部分较高，人体必需氨基酸含量均高于对照药材。
6）不同产地赤芝无机元素的比较测定，见表29-10
表29-10不同产地赤芝无机元素的比较测定（μg/g）
无机元素含量
产地
浙江I
浙江II
龙门
日本
揭阳
广州
泰山
Fe铁
87.47
136.08
79.16
74.43
140.90
139.30
200.0
Zn锌
30.77
42.51
47.74
27.18
28.53
16.67
40.2
Sr锶
1.79
18.34
1.62
2.52
5.74
4.26
1.3
Cu铜
9.16
7.73
9.86
7.43
10.20
7.58
10.0
Se硒
7.89
22.22
8.12
2.18
9.99
Mn锰
29.28
16.79
15.02
19.85
79.72
23.86
2.8
Ni镍
0.63
1.85
2.86
1.25
5.58
0.53
2.0
Cr铬
26.75
25.06
23.65
24.18
29.70
2.90
1.2
Mo钼
2.99
2.81
3.03
2.52
3.99
0.12
1.0
Co钴
0.02
0.35
0.33
0.08
0.26
0.10
1.0
V钒
0.04
0.39
0.21
0.11
0.26
0.05
1.0
Sn锡
0.76
1.39
0.43
0.26
0.53
＜0.3
Ge锗
10.38
17.87
11.85
10.28
16.15
0.5
Ba钡
7.33
25.54
10.52
8.00
7.83
62.0
As砷
6.23
9.91
9.13
2.92
8.51
B硼
6.89
4.01
3.14
3.04
4.28
2.9
Pb铅
1.40
2.74
1.39
2.19
2.04
5.0
Cd镉
0.85
1.04
0.66
1.17
1.50
0.17
0.5
Be铍
0.00
0.00
0.00
0.00
0.00
＜0.05
Ca钙
1253.3
2802.6
981.0
522.2
1676.0
300.0
Mg镁
527.2
809.2
522.2
513.5
736.5
620.0
7）不同菌材培育的赤芝总氮量比较测定，见表29-11
从表29-11看出：板栗、红椎培育的赤芝总氮含量高于对照品。
8）不同菌材培育的赤芝中氨基酸含量的比较测定见表，29-12
表29-12不同菌材培育的赤芝中氨基酸含量测定
氨基酸名称
红椎
黧蒴
板栗
木麻黄
乌桕
对照药材
天门冬氨酸
0.8379
0.9976
1.0419
1.0490
1.3074
0.6273
苏氨酸*
0.4657
0.5632
0.5869
0.5703
0.7138
0.3646
丝氨酸
0.3207
0.4006
0.055
0.4001
0.5022
0.2975
谷氨酸
1.0102
0.9981
1.1052
1.1520
1.4388
0.5938
脯氨酸
0.4120
0.4675
0.4656
0.4879
0.5926
0.2886
甘氨酸
0.5137
0.6038
0.6081
0.6146
0.7764
0.3634
丙氨酸
0.5651
0.6599
0.6834
0.6952
0.8794
0.3812
胱氨酸
微量
微量
0.0421
微量
微量
0.0522
缬氨酸*
0.6006
0.7081
0.7226
0.7522
0.9198
0.4128
甲硫氨酸*
0.0789
0.0891
0.0925
0.1055
0.1088
0.0619
异亮氨酸*
0.4487
0.5300
0.5457
0.5438
0.6689
0.4587
亮氨酸*
0.6743
0.7838
0.7964
0.8216
1.0238
0.5242
酪氨酸
0.1597
0.2038
0.2035
0.1922
0.2475
0.1535
苯丙氨酸*
0.4495
0.5306
0.5711
0.5468
0.6770
0.3074
赖氨酸*
0.4156
0.4458
0.5027
0.5104
0.6397
0.2326
组氨酸
0.1494
0.1861
0.1874
0.1698
0.2282
0.0866
精氨酸
0.4071
0.4904
0.5116
0.6211
0.2166
牛黄酸
0.0495
0.4495
0.0516
0.0468
0.0514
0.0460
必需氨基酸总量3.1233
3.6506
3.8179
3.8466
4.7518
2.3622
氨基酸总量
7.55
8.67
9.10
9.18
11.39
5.42
支链氨基酸
1.7236
2.0218
2.0647
2.1176
2.6125
1.3957
芳香族氨基酸
0.6092
0.7344
0.7746
0.7390
0.9245
0.4609
注：*号为人体必需氨基酸。
从表29-12看出：所含人体必需氨基酸总量与总氨基酸比值分别为41.7%，41.9%，42%，42.1%，41.4%，43.6%。根据FAO/WHO(世界粮农组织与卫生组织）提出的参考蛋白模式，“必需氨基酸”总量应达40%左右的标准，以上5种菌材培养的灵芝均已达到。
9）不同段木赤芝无机元素含量的比较测定（见表29-13）
10）不同生长期赤芝中灵芝酸8含量比较测定为了考察灵芝酸8在灵芝中的分布情况，我们采用反相高效液相色谱法对以段木培养的灵芝不同生长阶段中灵芝酸V进行了含量分析（见表29-13）。
表29-13不同段木赤芝无机元素含量的比较测定（μg/g）
段木
无机元素含量
红椎
黧蒴
木麻黄
板栗
乌桕
枫香
铁
140.90
414.76
204.05
179.61
107.78
370.50
锌
28.53
50.08
31.53
58.34
41.14
28.90
锶
5.74
3.52
3.33
6.89
6.13
5.71
铜
10.20
43.73
4.68
36.46
22.48
4.14
硒
9.99
4.46
7.07
9.38
1.12
22.60
锰
79.72
24.04
23.02
20.98
44.87
52.44
镍
5.58
2.81
0.96
1.82
2.77
2.20
铬
29.70
21.91
26.43
22.84
32.31
16.93
钼
4.00
3.71
3.06
4.26
3.93
4.93
钴
0.26
0.14
0.05
0.24
0.51
0.53
钒
0.26
0.21
0.30
0.31
0.22
0.55
锡
0.53
0.65
0.47
0.79
0.75
1.64
锗
16.15
14.02
11.63
16.02
16.22
18.37
钡
7.83
5.63
6.92
15.69
11.61
12.69
砷
8.51
8.87
6.13
9.14
8.07
9.95
硼
4.28
8.40
2.45
3.60
3.79
3.96
铅
2.05
1.98
2.06
1.41
1.48
1.66
镉
1.50
1.75
0.70
1.20
0.98
0.89
铍
0.00
0.00
0.00
0.00
0.00
0.02
钙
1676.0
1233.9
1367.3
1714.3
1502.2
4167.8
镁
736.5
659.5
573.4
807.9
866.5
873.8
表29-14不同生长期赤芝中灵芝酸8含量测定（n=3）
样品
生长期
灵芝酸B（mg/g）
RSD（%）
1
5
0.86
1.21
2
10
0.34
2.31
3
25
0.33
1.20
4
45
0.33
1.43
5
成熟期
0.26
1.37
从表29-14的结果表明：赤芝到了成熟期灵芝酸8含量最低。一般认为灵芝越成熟味越苦，对灵芝酸B的含量测定则表明，灵芝酸8的含量随生长期的延长而降低，灵芝酸8是微苦的成分，在结构上与具有苦味的成分灵芝酸A、灵芝酸C1相似，这3种成分是否在成熟过程中发生转化，尚待进一步研究。
11）不同生长期赤芝中灵芝酸B含量比较测定
赤芝的生长大致分为菌柄生长期、菌盖扩展期、菌盖成熟期、老化期，不同时期的有效成分含量有差异（见表29-15）。
表29-15不同采收期赤芝人体必需氨基酸含量测定结果（%)
氨基酸名称
扩展前期
扩展期
成熟期
老化期
对照品
苏氨酸
0.7764
0.5003
0.5003
0.3971
0.3646
缬氨酸
0.8886
0.5633
0.5642
0.4408
0.4128
甲硫氨酸
0.1523
0.1113
0.1039
0.0762
0.0619
异亮氨酸
0.8014
0.5608
0.6062
0.8991
0.4587
亮氨酸
1.0034
0.6797
0.6036
0.6528
0.5242
苯丙氨酸
0.6561
0.4360
0.4341
0.3384
0.3074
赖氨酸
0.7202
0.4121
0.3876
0.3239
0.2326
必需氨基酸总量
4.9984
3.2635
3.1999
2.8283
2.3622
表29-15结果显示：灵芝生长初期总氨基酸含量较高，为标准品的2倍多；至成熟期趋于稳定，到老化期又衰减。可能与生长初期代谢较旺盛，从菌材中吸收利用的营养物质较多有关；当子实体成熟时，组织器官发育分化基本稳定，各营养成分亦保持相对平衡；老化期，则由于成分分解消耗等原因而减少。提示灵芝药材采收宜选择适宜时期，综合考虑成分含量与产量。
12）灵芝不同部位中灵芝酸B的含量比较测定
灵芝的不同部位，由于其营养运输和贮藏组织有异，在吸收营养转化成初生代谢物，以及积累和贮藏均可能出现差异。我们提取分离并鉴定了灵芝中的成分灵芝酸B，以其为指标测定了灵芝中不同部位中灵芝酸8的含量（见表29-16）。
表29-16灵芝不同部位中灵芝酸B的含量测定
样品
灵芝酸B（mg/g）
RSD（%）
菌盖表皮层
0.56
2.01
木栓层
0.19
1.78
菌柄
0.29
1.22
菌盖子实体全部
0.53
1.82
孢子粉
0.087
1.27
赤芝发酵菌丝体
未测出
紫芝菌盖
极微量
由表29-16可以看出：菌盖表皮层灵芝酸B的含量较高，其次是菌盖子实体全部和木栓层，紫芝中含有极微量的灵芝酸8，而赤芝发酵菌丝体中未测出灵芝酸B，因此该成分也可作为区别赤芝及其发酵菌丝体的指标之一。13）21批灵芝孢子粉指纹图谱
取同一灵芝菌种不同批号的灵芝孢子粉21批进行指纹图谱测定，结果见图29-2，并对其相似度进行分析，其结果见表29-17。
表29-17灵芝孢子粉各相似度分析结果
批号
相关系数法(峰面积）
相关系数法(全图谱）
相关系数法(全图谱）
夹角余弦法（全图谱）
1
0.998635
0.998995
0.983889
0.978314
2
0.993272
0.994510
0.987120
0.981495
3
0.981743
0.976334
0.975479
0.976956
4
0.998289
0.998604
0.986521
0.986089
5
0.984959
0.986059
0.993180
0.992852
6
0.992187
0.992942
0.994300
0.993901
7
0.979530
0.972719
0.980191
0.980604
8
0.980292
0.978990
0.988201
0.988799
9
0.971902
0.963713
0.971477
0.973095
10
0.995601
0.996259
0.992445
0.991151
11
0.998280
0.998384
0.988856
0.983029
12
0.995213
0.995778
0.925894
0.940664
13
0.994335
0.995322
0.909768
0.906915
14
0.995885
0.996515
0.985455
0.981483
15
0.998973
0.998972
0.987298
0.982268
16
0.993969
0.995210
0.991312
0.990111
17
0.992881
0.994188
0.985036
0.984068
18
0.999094
0.999237
0.989690
0.984990
19
0.996007
0.996636
0.987838
0.987165
20
0.998275
0.998559
0.991617
0.990859
21
0.996339
0.997277
0.989931
0.987774
从表29-17结果可知：用表中方法计算的各批灵芝孢子粉指纹图谱的相似度都在0.9~1.0，显示各批次图谱相似度较高。
（2）含量测定
1）灵芝酸B含量测定
灵芝酸B亦是灵芝的主要成分之一。用超声波、索氏提取法、冷浸法，分别以氯仿或甲醇进行提取。用甲醇进行提取，提取成分较多，影响灵芝酸B与相邻峰的分离，以氯仿提取，并以冷浸法和索氏法提取较好，但由于冷浸法受室温影响，提取率有波动，故以索氏法提取较佳（4h），同时对提取后的残渣再以氯仿提取检测，灵芝酸B可基本提尽。测定结果，龙门基地的赤芝含灵芝酸B0.26%。2）灵芝多糖的提取和测定灵芝多糖是灵芝的主要成分之一。对照品溶液的制备：精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品适量，加水制成1ml含0.1mg的溶液，即得。
精密称取供试品2ml，置10ml具塞试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“精密加入硫酸蒽酮溶液6ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含葡萄糖的重量（mg），计算，即得。
药典规定：本品按干燥品计算，含灵芝多糖以无水葡萄糖〈计，不得＜0.50%。
广州中医药大学龙门基地的赤芝多糖含量测定方法，采用加蒸馏水在沸水浴上提取多糖，栽培品宜1.5~2.0h，野生品宜4h。用氢氧化钠或草酸作为提取剂，可获得较多的灵芝多糖。以85%的酒精提取测定多糖比较合适。多糖含量测定用苯酚-硫酸法，测定结果为0.97%。
3）灵芝多肽的分离检测
灵芝多肽药理作用明显。
取灵芝子实体热水提取液浓缩，用乙醇沉淀，上清液流经732（H）型阳离子交换树脂柱，以蒸馏水洗脱除尽糖后，改以3%NH3·H2O洗脱，收集洗脱液中茚三酮显色部分，冻干得粗肽。以少量水溶解，加样于PH5.0（用稀HAC平衡）DA-201大孔吸附树脂柱，0.01mol/L、HOAC洗脱，可见色素被吸附，多肽则从洗脱液中洗出，测定紫外吸收，最大吸收峰在210mm和254mm处。洗脱液浓缩后，流经凝胶SerhadexG-15柱，以H2O洗脱，紫外254nm检测，使多肽与氨基酸和盐分开，手机多肽组分，冻干后以0.01mol/L、NH4HCO3缓冲液溶解，加样于DEAE-Cellulose柱进行分离，分别以0.01mol/L、0.05mol/L、0.2mol/L、0.4mol/L，PH8.5NH4HCO3缓冲进行阶段性梯度洗脱，紫外检测，共收得5个组分。以新华VI号层析滤纸，电泳液为PH7.2的Tris-HCL缓冲液，工作电压1200V，电泳时间6h上述多肽进行高腿电泳，以CL2-KI-淀粉和茚三酮分别对照显色后确认GPC1、GPC2为碱性肽，GPC3为为中性肽，GPC4和GPC5为酸性肽。
